详解细胞毒性检测方法及影响实验关键因素

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　　MTT法又称MTT比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。

　　在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。

　　影响实验关键因素：

　　细胞消化。若消化出现问题，则会影响细胞的活性，进而影响OD值。对于 MDA-MB-231、MCF-7、HS-578T 等一系列容易消化的细胞，消化时胰蛋白酶中不添加EDTA，消化时也仅需胰酶浸润数秒即可。然而，对于SW480等一系列难以消化的细胞，胰蛋白酶中需添加浓度为0.25%的EDTA；接种数量。对于细胞接种数量要适宜，过小或过大均会影响OD值（过小细胞容易死亡，过大细胞容易生长拥挤）。

　　结晶物的溶解。加入DMSO，放入37℃孵箱内孵育10～20 min，有助于DMSO对紫色结晶物的溶解。培养液的弃去。或用移液器吸取孔内培养液，吸取的时候要注意移液头要紧贴孔内侧壁吸取，不要触碰底部的紫色结晶。或将96孔板倒扣于滤纸上来吸取孔内的培养液。

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